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原位雜交-原位雜交服務-武漢貝科新肽公司(多圖)

武漢貝科新肽科技有限公司

  • 主營產品:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
  • 公司地址:湖北省武漢市洪山區關山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號
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 組織原位雜交(Tissue in situ hybridization),即原位雜交組織化學技術和原位雜交細胞化學技術

  原位雜交技術的基本原理

  利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。

  1.兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子

  2.應用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P,熒光素、生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交

  3.用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位

  用原位雜交術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。

  此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。











原位雜交技術的原理是什么?有何用途

  原位雜交技術的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結合成專一的核酸雜交分子,經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件:組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物(曾呈奎等2000)。





預雜交

1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。

2)用等體積的HYB+取代HYB-。

3)60℃水浴,預雜交4小時以上。

雜交

1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..

2)60℃ 溫浴過夜。

 注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結合越好,溫度越高,背景越小。



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